半貼壁半懸浮細(xì)胞接收注意事項

半貼壁半懸浮細(xì)胞接收注意事項：                                                                            半貼細(xì)胞和貼壁不牢細(xì)胞：經(jīng)過快遞運輸顛簸會出現(xiàn)漂浮脫落等情況。收到T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在60%以下，需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。

半貼壁半懸浮細(xì)胞傳代步驟：
準(zhǔn)備工作：胰酶和培養(yǎng)基（需要提前37度復(fù)溫）、PBS（常溫）避免細(xì)胞遇冷受刺激                                                    （1） 吸出原培養(yǎng)液至離心管內(nèi)（里面是正常懸浮細(xì)胞不可丟棄）            （2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄            （3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞。    （4） 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時及時關(guān)注消化時間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大，顯微鏡下看細(xì)胞呈單個游離狀態(tài)，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時可終止消化，可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。（消化時主要看消化狀態(tài)，如果沒有變圓，側(cè)立時不能滑落時，可以適當(dāng)延長消化時間，每30s觀察一次細(xì)胞）    （5） 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打（不要太用力）使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。                （6） 收集細(xì)胞懸液至懸浮細(xì)胞離心管內(nèi)一起離心1000rpm/min（約250g）  5分鐘，離心完吸出上清丟棄。                                    （7） 加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。

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