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LAD2/LAD-2細(xì)胞培養(yǎng)方法

發(fā)布時(shí)間:2026-04-09瀏覽:261次

LAD2/LAD-2細(xì)胞培養(yǎng)方法

產(chǎn)品名稱:LAD2細(xì)胞、LAD 2細(xì)胞、LAD-2細(xì)胞

中文名稱:人肥大細(xì)胞肉瘤/白血病細(xì)胞

年齡: 44歲(44 years)

性別: 男(Male)

細(xì)胞類型: 肥大細(xì)胞(Mast cell)

生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)(Suspension)

慧穎生物提供P1代LAD2/LAD-2細(xì)胞,復(fù)蘇周期2周左右,僅供科研使用,不得用于臨床診斷。

拆包/儲(chǔ)存:

1. 請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進(jìn)

行培養(yǎng)傳代

注意:如為凍存管,請(qǐng)收到后立即解凍培養(yǎng)。若來(lái)不及解凍,請(qǐng)儲(chǔ)存于液氮中(存儲(chǔ)于負(fù)80度,會(huì)降低細(xì)胞存活率)

培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟:

對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,寄送前,我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培

養(yǎng)瓶,以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中細(xì)胞所受震蕩。

1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后,請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置

顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。

2. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于37℃培養(yǎng)箱中直至溫度平衡,隨后,在生

物安全柜中,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中,離心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞。

3. 對(duì)上述細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè),調(diào)整細(xì)胞密度至 2- 3×105cells/mL,并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中。

4. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5% CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如

果細(xì)胞達(dá)到傳代培養(yǎng)的密度,則進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

凍存細(xì)胞操作步驟:

注意:為保存細(xì)胞的高存活率,請(qǐng)收到產(chǎn)品后,立即解凍培養(yǎng)。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來(lái)回晃動(dòng),迅速解凍。為避免污染,確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存 管表面。從此步開(kāi)始,后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL培養(yǎng)基的離心管中, 離心200×g / 5 - 10 min,用真空泵去除含有凍存液的上清。

4.用培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率,請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng):

懸浮細(xì)胞的傳代可通過(guò)補(bǔ)加或置換新鮮培養(yǎng)基的方式來(lái)完成,具體做法如下:

1. 取出少量細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè),當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1.5×106 cells/mL 時(shí),進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

2. 取足量細(xì)胞加入到盛有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,將細(xì)胞密度維持在5×105cells/mL。

3. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5%CO2 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 。如果細(xì)胞達(dá)到傳代培養(yǎng)的密度 ,則進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。

注意:培養(yǎng)瓶應(yīng)使用帶濾膜瓶蓋,以保持培養(yǎng)基中的空氣和CO2

細(xì)胞凍存:

離心收集細(xì)胞后,加入適量?jī)龃嬉海抗芗?xì)胞凍存量達(dá)到10的6次方),將凍存管放入凍存盒置于負(fù)80冰箱,24h后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。

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