LAD2細胞、LAD 2細胞、LAD-2細胞操作步驟

產(chǎn)品名稱：LAD2細胞、LAD 2細胞、LAD-2細胞

中文名稱：人肥大細胞肉瘤/白血病細胞

細胞來源：骨髓

疾病 ：肥大細胞肉瘤/白血病

傳代比例： 1：2傳代，消化2-3分鐘，

培養(yǎng)環(huán)境： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

完培配置： 該細胞系培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為 LAD-2細胞專用培養(yǎng)基。；推薦使用HAKATA培養(yǎng)基，W-P-500;

細胞形態(tài)： 上皮細胞樣

生長特征： 懸浮生長

倍增時間： ~12-15天

凍存條件： 凍存液：90%FBS，DMSO 10%,或推薦HAKATA H-W-100

保藏機構(gòu)： ABM; T8157

細胞接收：
1：觀察有無破損漏液情況 ，如有請拍照及時聯(lián)系客服。

2 ：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài) ，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 ，放入培養(yǎng)箱靜止

2- 3小時穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3 ：請按照細胞操作指南進行第一次傳代凍存處理。

4 ：產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養(yǎng)操作指南。

5 ：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡?，可隨時聯(lián)系客服

6.收到后，培養(yǎng)條件(完培配置)需跟保持一致，如有變動銷售另行告知

僅限于科學研究 ，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

懸浮細胞接收后的處理：

1. 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-4h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損 、有液溢出及細胞有污染 ，請拍照后及時聯(lián)系我們

2. 靜置完成后，請在顯微鏡下確認細胞狀態(tài) ，同時給剛收到的細胞拍照(10x ，20x)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù) 。

3. 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中，(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基) 。

備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞 。收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。

懸浮細胞的復蘇、傳代、凍存步驟：

1. 懸浮細胞復蘇:從液氮灌中或-80℃C冰箱中查找到需要復蘇的細胞，水浴鍋提前打開預(yù)熱37℃℃

2. 復蘇細胞:從液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要復蘇的細胞，水浴鍋提前打開預(yù)熱 37℃;1)將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍;

3. 加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻;

4. 棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞 。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基接種于 T25 培養(yǎng)瓶中(或6cm 皿中) ，培養(yǎng)guo夜，第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度 。

懸浮細胞傳代:如果細胞密度達80%-90% ，即可進行傳代培養(yǎng) 。方法一:將細胞懸液收集到離心管中1000rpm， 離心5min ，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力 。方法二:半換液處理，豎著培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱靜置10-20min 左右 ，肉眼可見大部分細胞沉在底部;輕輕吸掉 3ml左右培養(yǎng)基，將剩余細胞懸起混勻;

5. 將細胞懸液按 1:2到 1:3 的比例分到新的含 5-6 m 培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次

懸浮細胞凍存:

1.收集瓶內(nèi)所有細胞懸液吸至離心管，如懸浮細胞貼壁需要把貼壁的細胞吹下來一起收集離心，可使用血 球計數(shù)板計數(shù)，來決定

2. 細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1x10^6~1x107個活細胞/ml;2)1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1x10^6~1x107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱 、代數(shù) 、日期等信息;

3.按凍存數(shù)量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱過夜，后續(xù)可轉(zhuǎn)入液氮罐中長期保存。

LAD2細胞增殖速度較慢，2-3周發(fā)貨，請老師下單后準備好培養(yǎng)條件，如需更多細胞株細胞系、原代細胞、耐藥株、永生化細胞、IPS誘導細胞等，請聯(lián)系上?；鄯f生物市場部。