HT-144細胞，新引進，代次低，活性高

產品名稱：HT-144細胞

中文名稱：人黑素瘤細胞

細胞背景：HT-144 人黑素瘤細胞是一種常用于黑色素瘤研究的細胞系，從一位 29 歲白人

男性患者的皮膚惡性黑色素瘤中分離得到。

細胞特性：形態(tài)：成纖維細胞樣，貼壁生長。 用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件：1）準備 McCoy's 5A，含 L-谷氨酰胺（推薦HAKATA貨號：A19713）培養(yǎng)基；胎牛血清（推薦HAKATA胎牛血清PRO MAX HB-FBS-500），10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

貼壁細胞注意事項：

一.消毒靜置等細胞穩(wěn)定后拍照 100X 和 200X。棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 潤洗細胞 1-2 次并吸走。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細

胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細胞脫落，如脫落 90%以上則對應 3-6ml 含有 10%血清的培養(yǎng)基終止，以防胰酶殘留損傷細胞。如

果貼壁非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過 2 分鐘后終止消化，再加入 1ml 培養(yǎng)基讓細胞緩沖后再過 2 分鐘進行二次消化，反復分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜?；虿捎霉萎a刮細胞

的方式處理也可以。總歸原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。

三. 消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按 1:2 和以上比例進行，具體以實際細胞密度決定。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。

運輸方式：

常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態(tài)拍照 2-3 張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復凍存 2-3 只后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細胞發(fā)貨凍存管 2 只，復蘇 1 只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知銷售。

生物安全：1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

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